|
|
|
||||||
|
|
|||||||
|
RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES
TUMORES V - EXPRESION PROTEICA Y TUMORIGENESIS Coordinadores: E Rivera, RA Ruggiero 180. Terapia génica en tumores de cerebro mediante el uso
combinado del gen suicida HSV-tk/GCV (timidina quinasa del virus
Herpes Simplex/ganciclovir) y citoquinas. M.Berenstein1, L.Chemes1, S.
Adris1, M.V.Guagliardo1, I. Sorin2, Y. Chernajovsky3 ,O Podhajcer1. La transferencia del sistema HSVtk/GCV, en un modelo de glioma C6 de rata, establecido por estereotaxis, mostró un efecto antitumoral y la generación de una respuesta de memoria. Estos resultados nos llevaron a combinar dicho sistema con la transferencia genética de IL-12. Inicialmente, el 70% de los animales inoculados con C6 productoras de IL-12 (C6-IL-12) (n=7) sobrevivió a los controles C6-neo (n=6), mostrando ausencia o mínima masa tumoral residual. La coinyección de células C6 con células productoras de retrovirus conteniendo el gen HSVtk (VPC-tk), el gen de IL12 (VPC-IL12) o la combinación de ambos (n=6 por grupo) mostró una sobrevida mayor a 90 días en el 33-50% de los animales (p<0,0001 con respecto al control). En tumores C6 de 5 días, el tratamiento con VPC-IL12 (n=12), VPC-tk (n=12) o la combinación de ambos (n=9) logró erradicar el tumor en un 35, 42 y 40% de los animales, respectivamente. En tumores C6 de 3 días, el tratamiento con VPC-tk (n=8) o combinado con VPC-IL12 (n=8), logró un aumento de la sobrevida a más de 60 días del 75 y 50% respectivamente, con respecto al grupo control (n=3). En todos los casos, las ratas sobrevivientes rechazaron un desafío con células C6 implantadas en el hemisferio contralateral. Controles tratados con VPC-neo no mostraron una supervivencia significati-vamente diferente del control. Los resultados sugieren que la transferencia del gen de IL-12 puede curar gliomas de rata. Resta determinar bajo que condiciones la combinación de HSVtk + IL-12 resulta más efectiva.
181. Expresión de proteína p21 y p27 en la regresión de un
adenocarcinoma mamario murino inducida por estró-genos y por
antiprogestágenos. Silvia Vanzulli, Eleonora Pagano, Claudia Lanari y
AA Molinolo. La línea del adenocarcinoma mamario murino transplantable 59-2-HI de crecimiento autónomo regresiona con estradiol (E2, pellet de 5mg) o con los antiprogestágenos: ZK 98299 (10mg/kg/día) y RU 486 (6,5mg/kg/día) sc. Se demostró morfológicamente que un efecto citostático sostenido y un pico de apoptosis entre las 24 y 48hs de tratamiento participan en la regresión. En este trabajo se estudia la expresión de las proteínas p21 y p27 en relación a los efectos descriptos previamente. Ratones hembras Balb/c portadores de tumor de 25 a 50 mm2 se trataron con E2, ZK o RU o no recibieron tratamiento. Los tumores fueron resecados diariamente entre las 24 y 96 hs de tratamiento para determinar la expresión de p21 y p27 mediante técnicas inmunohisto-químicas con anticuerpos policlonales detectados por el método ABC. Se cuantificó la positividad nuclear en 10 campos de 100x. Los resultados mostraron en los controles (p21=12,26±7,12; p27= 14,15±8,34); a las 24hs pos-tratamiento: E2 (p21= 132,7±28,05; p27=126,1 ±10.71), RU (p21=82,6±12,38; p27=62,7±8,14) y ZK (p21=79.4± 9,32; p27= 75,45±8,70) y a las 96hs : E2 (p21= 50,6±9,78; p27 =47,2±5,53), RU(p21=7,9±2,33; p27=4,7±1,70) y ZK (p21=31,3 ±4,69; p27= 29,1±7,99). Los tres tratamientos a las 24 hs inducen un significativo aumento (p<0,001) de la expresión de ambas proteínas y los mismos disminuyen a los cuatro días en correlación con los hallazgos de apoptosis.
182. PTA modula el estado de fosforilación de proteínas
dependientes de Ca2+-CaM en extractos celulares de mamíferos y
anfibios. G Barisone*, A Vidal**, F Vega**, M Cabada*, F Domínguez** La Protimosina alfa (PTA) es una proteína de 12,6 kDa, filogenéticamente conservada y encontrada en gran variedad de tejidos. Originalmente considerada una hormona tímica, datos actuales indican una relación con la proliferación y diferenciación celular. Elevados niveles de PTA se correlacionan con la capacidad proliferativa celular en tumores malignos. Se ha demostrado que PTA modifica la actividad de calmodulina quinasas (CaMK). El objetivo de este trabajo consiste en la caracterización del patrón de fosfoproteínas inducido por PTA. El agregado de PTA a extractos de la línea NIH-3T3 provoca la desfosforilción de una proteína de 40 kDa. El efecto resultó dependiente de Ca2+ y calmodulina (CaM). La proteína fue purificada y secuenciada, demostrando ser G3PDH, enzima sustrato de CaMKII. Mediante técnicas de fosforilación in vitro y Western Blot, se comprobó que PTA induce la fosforilación de CaMKII. Experimentos realizados sobre extractos de ovocitos del anfibio Bufo arenarum indicarían resultados similares. Estos datos permiten proponer que PTA afecta el estado de fosforilación de CaMKII, regulando su actividad y por lo tanto la fosforilación de sus sustratos.
183. Tumores de la granulosa obtenidos por oncogenésis dirigida
conservan la expresión del receptor de la hormona anti-Mülleriana
(AMH-R) : un modelo para “targeting” diagnóstico y terapéutico.
Wen-Qing Long, M Dutertre, Lucile Gouédard, Nathalie di Clemente, JY
Picard, Nathalie Josso, R Rey. Las recidivas de los tumores de la granulosa (TG) del ovario, que expresan AMH-R, tienen una alta tasa de mortalidad. En el sexo femenino después del nacimiento, AMH-R se expresa exclusivamente en las células de la granulosa: un targeting diagnóstico y terapéutico sería entonces factible ante un TG, usando al AMH-R como blanco. Ratones transgénicos, obtenidos por oncogénesis dirigida, fueron usados como modelo experimental. Las hembras desarrollaron TG, que expresaban AMH-R. Una línea celular clonal fue derivada de un TG. Luego de 15 pasajes la línea celular conservaba la expresión de AMH-R, detectada por Northern blot e hibridización in situ, y unía AMH marcada con iodo radioactivo. Los ratones transgénicos que desarrollan TG y la línea celular derivada representan una herramienta de utilidad para desarrollar una estrategia de targeting diagnóstico y terapéutico de los TG, usando como blanco al receptor de la AMH.
184. Expresión alterada de retinoblastoma, p16 y ciclina D1 en
tumores paratiroideos. Irene Szijan, Viviana Dalamón, Patricia
Vergani, Karina Danilowicz, N Mezzadri, Irene Orlow, OA Bruno Las alteraciones en oncogenes y/o genes supresores tumorales llevan al desarrollo de tumores y pueden usarse como marcadores de malignidad. Los carcinomas paratiroideos son difíciles de distinguir histológicamente de los adenomas y es necesario un método de diagnóstico diferencial. Con este objeto se estudiaron genes reguladores del ciclo celular: RB, p16 y ciclina D1, en 6 adenomas y 5 carcinomas paratiroideos, por determinación de: a) Pérdida alélica (LOH) por medio del análisis del microsatélite RB1.20 y b) Expresión de RB, p16 y ciclina D1 por inmunohistoquímica. Uno de 6 adenomas y 1 de 2 carcinomas mostraron LOH. La proteina RB estaba ausente en 4 de los 5 carcinomas y presente en todos los adenomas. En cambio, ciclina D1 estaba ausente en todos los adenomas y presente en 3 de los 4 carcinomas. El carcinoma que presenta RB es el mismo que no expresa Ciclina D1 se comportaría como adenoma. p16 dió positivo solo en un carcinoma. Estos resultados muestran una expresión normal de RB y ciclina D1 en adenomas y ausencia de RB junto con una sobreexpresión de ciclina D1 en carcinomas. Esto podría servir como método para el diagnóstico de carcinomas.
185. Expresión de c-fos y PCNA en un tumor mamario
experimental. Alicia Gutierrez, Claudia Cocca, Gabriela Martín,
Graciela Cricco, Elena Rivera, H. García*, E. Mocetti*, M. Croci,
Rosa Bergoc. El objetivo de este trabajo fue analizar la expesión de c-fos, gen clásicamente relacionado con la expresión temprana de eventos proliferativos, y PCNA, proteína relacionada con la proliferación celular, en un tumor mamario experimental inducido mediante inyección ip de N-nitroso-N-metilurea en ratas normales y diabéticas. Para ello se emplearon técnicas inmunohistoquímicas. Muestras representativas de todos los tumores fueron congeladas para la detección de c-fos o conservadas en formalina para la detección de PCNA, seccionadas, incubadas con los respectivos anticuerpos y teñidas. La observación microscópica y conteo de 10 campos por muestra indicó que ambas proteínas se expresan en mayor proporción en los tumores de ratas normales respecto a diabéticas: el 56,2% de los núcleos totales expresaron c-fos en tumores normales y sólo el 7% en las diabéticas; en cuanto a PCNA, se contaron 18±2 núcleos positivos en normales versus 8±1 en diabéticas. Los resultados concuerdan con el patrón de malignidad previamente reportado en los tumores de ratas normales y las adenosis benignas observadas en las diabéticas.
|
|||||||