RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES ORALES

INFECTOLOGIA II - BACTERIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

Coordinadores: N Sanjuan, D Manigot

174. Escherichia coli libera vesiculas con DNA durante la fase estacionaria. N Sanjuan, Marta Almirón, R Kolter
Department of Microbiology & Molecular Genetics Harvard medical School, Boston, USA

La fase estacionaria de crecimiento es aquella en la cual las poblaciones bacterianas normalmente viven en la naturaleza. Los eventos biológicos de esta fase son poco conocidos. El objeto de este trabajo fue estudiar algunas características ultraestructurales de cultivos bacterianos en fase estacionaria. Se emplearon las cepas de Escherichia coli 17-2 (enteroagregativa, salvaje) y K-12, de laboratorio, crecidas en medio LB a 37°C, y estudiadas en distintos momentos de la curva de crecimiento por microscopía electrónica (ME) con tinción negativa. Sólo en la fase estacionaria se observaron vesículas de 120-200 nm brotando hacia el medio desde el soma bacteriano. Las vesículas fueron purificadas por precipitación con PEG y ultra-centrifugación diferencial. En cortes ultrafinos de ME se las ve rodeadas de una unidad de membrana y con un centro electrón-denso. Se detectaron hebras de DNA bi y monocatenario en las vesículas por el método de Kleindschmidt y sombreado metálico, y por electroforesis en geles de agarosa. El DNA parece ser cromosómico y está asociado a proteínas. Entre estas se detectó a p-20, una proteina externa de fase estacionaria, ya descripta por los autores. Se propone que este es un nuevo mecanismo de liberación de material genético, hasta hoy no descripto en E. Coli.

175. Detección de diferencias por Inmunoblot entre Leptospiras interrogans de cepario y aislamientos provenientes de las localidades de Ameghino, Rufino y Navarro. Adriana Fontanals, Alicia Escudero, L Sammartino, Silvia Mundo
Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA; *INTA Castelar.

Leptospira interrogans pomona infecta al ganado bovino causando abortos. La medida preventiva es la vacunación con bacterinas. A fin de detectar diferencias inmunogénicas entre cepas vacunales y aislamientos, se analizaron sueros de animales vacunados e infectados mediante técnicas de inmunoblot. Se estudiaron 10 bovinos vacunados con vacuna comercial y 10 bovinos positivos a la aglutinación microscópica frente a serova-riedad pomona. Por PAGE se observó múltiples bandas en la zona de 100 kDa hasta 35 kDa y pocas en la zona desde 30 hasta 6.5 kDa, sin poder detectarse diferencias entre los antígenos de cepario y los aislamientos. El análisis de los inmunoblots de los aislamientos y cepas vacunales frente a cada uno de los sueros demostró escasa reacción antígeno anticuerpo en la zona de alto peso molecular y gran cantidad de bandas a partir de 45kDa y hasta 12 kDa. Frente a los aislamientos pudo verse una banda de reacción muy fuerte en la zona de 25 a 45kDa; esta zona no pudo detectarse frente a los antígenos de cepario. Se observa pérdida de inmunogenicidad en las cepas vacunales con respecto a las de aislamiento por adaptación al cultivo.

176. Estudio de PCR en Chagas pediátrico. J Altcheh, S Brandariz, M Biancardi, M Levin, A Schijman, H Freilij
Parasitología, Hospital de Niños R. Gutierrez; INGEBI-CONICET, Buenos Aires.

Dos ensayos de PCR para la amplificación de 330 pb de ADN minicírculo y de 188 pb de satélite nuclear fueron desarrollados para detección de T. cruzi en sangre. Se analizó su validez para el diagnóstico y respuesta al tratamiento (nifurtimox) en 32 niños. Criterios diagnósticos: en < de 6 m T. cruzi en sangre (microhe-matocrito), en > de 6 meses serología reactiva por 2 técnicas. Resultados: Infectados: n:14, edad x: 48 m (2m-13a), PCR +: 11/14(78.5); No infectados: n :18, edad x : 19 m (21d-10a), PCR +: 1/18(5.6). En los controles postratamiento 5 niños negativizaron la PCR persistiendo con serología reactiva. Conclusiones: La PCR mostró una sensibilidad del 78.5% al diagnóstico. Esta técnica sería de utilidad como marcador precoz de la respuesta al tratamiento.

177. Enfermedad de Chagas en Pacientes trasplantados renales. Susana Albano, Valeria Mas,Graciela Boccardo, C Giraudo, P Massari, Teresita Alvarellos.
Hospital Privado, Centro Médico de Córdoba

El agente causante de la enfermedad de Chagas (Ech) es el tripanosoma Cruzi (T.C).En el año 1988, el INCUCAI, autorizó la utilización de riñones de donantes serológicamente positivos. En el presente estudio valoramos la respuesta clínica postrasplante y la presencia de ADN del TC. Se estudiaron 177 trasplantes (tx) renales en el período1994-1997.Todos los ptes fueron testeados pre-tx serológicamente con (HIA) y (TIF). Diecisiete de 177 receptores tuvieron serología positiva (Sp) o donante con Sp. Se incluyó un grupo control de 10 ptes con tx renal con serología negativa (Sn) y donantes con Sn. Los ptes fueron retesteados serológicamente y se realizó PCR para T.C a los 23.3±11meses post tx.[9-31]. Nueve de 17 ptes (7h-2m) edad media 43,8±16 años [19-61] tuvieron Sp y donantes Sn (Grupo1). Uno de estos ptes murió a causa de un evento no relacionado a ECh . Ocho de 8 fueron HAI(+), 5/8 TIF(+) y 6/8 PCR(+). Ocho /17 ptes (7h,1m),edad media 41.6 años [10-71], tuvieron Sn y recibieron un riñón de donante Sp (Gr. II). Un pte murió de una complicación no relacionada a ECh, otro pte abandonó el seguimiento. Uno de 6 tuvo HAI y TIF(+) y 5/6 tuvieron PCR(+). El grupo control mostró Sn y PCR(-). En la mayoría de estos ptes se pudo detectar la presencia de ADN del T.C en sangre periférica sin signos de reactivación o ECh aguda en el período de estudio. No hubo diferencia significativa en la sobrevida de los pacientes y de injertos con el grupo control. El hallazgo de ADN de T.C en ptes Sn, debería alertar sobre la posibilidad de transmisión de ECh por trasplante de órgano sólido.

178. Efecto de la vacunación intramamaria en la respuesta inmune local contra Staphylococcus aureus. Marisa Gómez, Fernanda Buzzola, Cristina Cerquetti, Verónica García, D. Sordelli.
Facultad de Medicina, UBA; CEFyBO-CONICET

Se ha demostrado la factibilidad de utilizar cepas vivas atenuadas (CVA) de S. aureus por vía intramamaria (Ima) para generar protección frente al desafío experimental con S. aureus. La inmunización indujo la presencia de significativos niveles de anticuerpos en leche. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la vacunación Ima sobre la respuesta proliferativa de linfocitos provenientes de ganglios asociados a la glándula mamaria. De acuerdo a los diferentes esquemas que indujeron protección, se inmunizaron ratones hembra con una CVA de S. aureus por ruta Ima durante la última semana de la preñez. Al cabo de 7 días, linfocitos de ganglios epigástricos se cultivaron en presencia de diferentes preparaciones antigénicas de S. aureus. Linfocitos provenientes de animales inmunizados mostraron respuestas proliferativas frente a S. aureus (bacteria muerta por calor y extracto de proteínas totales) significativamente mayores (p<0,05 Test de Wilcoxon) con respecto a los controles (ratones inoculados con salina). Se concluye que la vacunación por vía Ima con CVA de S. aureus induce poblaciones de linfocitos con memoria capaces de responder frente a una infección posterior por S. aureus.

179. Detección Rápida de Mycobacterium paratuberculosis por DMG (DNA Metyltransferases Genotyping). Silvia Mundo, Alicia Escudero, G Cicuttin, O Lopez.
Facultad de Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

Mycobacterium paratuberculosis (Mp) es un patógeno intracelular que causa la enfermedad de Jones en el bovino y posiblemente la enfermedad de Crohn en el humano. Produce una enfermedad persistente y se transmite a través de la leche de la vaca al ternero. Su resistencia a la pasteurización lo convierte en un riesgo potencial para la salud humana. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un método rápido de diagnóstico de Mp basado en DMG. El Mp tiene una inserción característica de 1475 pb dentro de su genoma (IS900) repetida hasta 12 veces, que sirve como blanco para diagnóstico por PCR y permite diferenciarlo de otros Mycobacterium. Se diseñaron primers biotinilados o no, que amplifican un fragmento pequeño de 153 pb, lo que permitió acortar los tiempos del PCR a 20 minutos. El amplicón posee dos sitios de metilación específicos para las metiltransferasas M.CviRI y M.dam y para las enzimas de restricción MspI y AciI. Inmediatamente a la obtención, se metila utilizando SAM tritiado y se detecta por métodos radiométricos. La especificidad de sitios de reconocimiento para las enzimas de restricción y las metiltrans-ferasas permite corroborar la especificidad del producto obtenido. La rapidez y posibilidad de automatización de este método permite el análisis de muchas muestras en corto tiempo.