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RESUMENES DE LAS COMUNICACIONES EN POSTER ONCOLOGIA V 442. Superantígenos y linfomas T murinos. Marcela Peper(1),
Virginia Francisco(1), Irene Nepomnaschy(1), Isabel Piazzon(1). Los superantígenos (Sag) se caracterizan por su capacidad de interactuar con cadenas variables beta (Vb) específicas del receptor T (TCR), independientemente de la especificidad del resto de las regiones variables del mismo. Los Sag inducen la proliferación y posterior deleción de las células T normales con las que interactúan. Se investigó el efecto del Sag codificado por el virus del tumor mamario murino BALB14 -específico para células T Vb14+- sobre células del linfoma T14, que expresan monoclonalmente la región Vb14. Se co-cultivaron células T14 con esplenocitos singeneicos pretratados con mitomicina-C, infectados con a) BALB14; b) BALB2 (control de especificidad) o c) no infectados. La proliferación a las 18Hs medida por incorporación de timidina tritiada (media de cpm + ES (x10-4 ) n=3) fue de a) 4.5+0.4, p<0.01; b) 1.1+ 0.1 y c) 1.0+0.1. A las 36Hs los porcentajes de células hipodiploides Vb14+ (técnicas citofluorométricas) expresados como la media del %+ES, n=3, fueron: a) 40+2, p<0.01; b) 10+1; c) 11+1. La sobrevida de ratones inoculados por vía iv con L14 fue significativamente mayor en el grupo infectado con la variante viral BALB14. Estos resultados sugieren que células del linfoma T14 proliferan y mueren por apoptosis en presencia de un Sag viral capaz de interactuar específicamente con la región Vb expresada en su TCR. Correlativamente, la expresión de dicho Sag en ratones portadores de esta neoplasia induce aumentos en su sobrevida 443. Ciclo celular y hepatocarcinogénesis química. Paula
Sacca(1), Fabiana Caballero(1), Alcira M.C. Battlle(1), Elba
Vazquez(1). Los oxidantes juegan un rol importante en la carcinogénesis, induciendo cambios estructurales en genes relacionados con cáncer, citotoxicidad y muerte celular. La metabolización del p-dimetilaminoazobeneceno (DAB) provoca daño peroxidativo y citotoxicidad hepática. En este trabajo estudiamos el efecto del DAB sobre la regulación del ciclo celular y analizamos la capacidad citoprotectora del ácido acetilsalicílico (ASA). Ratones CF-1 recibieron DAB (0,5% p/p) en el alimento durante 35 días y luego una dieta estándar de laboratorio (DSL) por 63 días. Los controles recibieron DSL durante 98 días. A ratones no tratados y tratados con DAB se les suministró ASA (0,16% p/p) en la dieta desde el día 36. Los niveles de ciclina D1, ciclina E, CDK4, CDK2, p21 y p53 se analizaron por western blott. El tratamiento con DAB incrementó la expresión de ambas ciclinas (D1 42% y E 55%) y de p21 (21%). No se detectaron cambios en la expresión de CDK2. El co-tratamiento con ASA revirtió a niveles basales la inducción de las ciclinas E y D1, mientras que CDK2 y p21 aumentaron (29% y 86% respectivamente). El oncogen p53 permaneció sin cambios y CDK4 disminuyó en todos los grupos. La sobreexpresión de ciclina E y de p21 refleja un arresto en G1 por efecto del carcinógeno. La alteración en la relación ciclina D1/CDK4 provocada por DAB, es una característica común en cáncer. Nuestros resultados sugieren que ASA podría actuar como citoprotector hepático en la iniciación de la carcinogénesis química. 444. Acido aminolevúlico y sus derivados en la Terapia
Fotodinámica de celulas tumorales murinas. Christian P. Perotti(1),
Adriana G. Casas(1), Haydée Fukuda(1), Alcira M.C. Batlle(1). La Terapia fotodinámica de tumores (TFD) a partir de ácido 5-aminolevúlico (ALA) es un tratamiento antineoplásico basado en la fotosensibilización de las porfirinas sintetizadas a partir de ALA. Los ésteres derivados de ALA, por su mayor hidrofobicidad, podrían aumentar su incorporación a las células y consecuentemente la síntesis de porfirinas. Se emplearon las líneas celulares LM2, LM3 y su derivada LM3-SNP resistente al óxido nítrico (NO) (IOAHRoffo), para investigar la eficiencia del ALA y sus derivados Hexil-ALA (He-ALA) y Metil-ALA (Me-ALA) como profotosensibilizantes, y la acción del NO en la TFD. En concentraciones óptimas LM3 fue la línea que más porfirinas sintetizó (ALA=240 ng/10x5 cél; He-ALA=195; Me-ALA= 160), seguida por LM3-SNP y LM2. Las líneas más productoras de porfirinas fueron las más susceptibles a la fotosensibilización. La presencia de NAME 1mM, inhibidor de óxido nítrico sintetasa (NOS) durante y después de la iluminación parece proteger del daño fotodinámico aún en la línea LM2 no productora de NO, sugiriendo que la TFD podría estar induciendo una forma inactiva de la NOS. 445. Alteración de la relación IGF-I/IGFBP3 en pacientes
pre-menopáusicas con enfermedad macroquística mamaria. Pablo J.
Enriori(1), Carlos R. Fischer(2), Jorge R. Gori(2), Alberto E.
Etkin(3), Ricardo S. Calandra(1), Isabel A. Lüthy(1). La enfermedad macroquística mamaria es la patología benigna más frecuente en mujeres pre-menopáusicas. Aunque no son consideradas lesiones pre-neoplásicas, se ha descripto un riesgo aumentado de cáncer de mama, especialmente en pacientes con quistes de tipo I (t-I) (Br. Med. J. 314:925, 1997). Además se describió un mayor riesgo de cáncer de mama en aquellas mujeres con la relación de concentraciones séricas de IGF-I/IGFBP-3 aumentada. Se estudiaron entonces dichas concentraciones en t-I (n=20) y portadoras de quistes tipo II (t-II; n=13) y 18 controles (C) normales. Las mismas se midieron por IRMA con kits comerciales. La concentración de IGF-I fue mayor en t-l (210±24 ng/ml, Media±SEM) que en t-II (147±14, p<0,044). Los niveles de IGFBP-3, la IGFBP más abundante, fue menor en t-I (2,81±0,15 ug/ml) que en C (3,59±0,16, p<0,002), no encontrándose diferencias entre t-I y t-II (3,21±0,16). La relación IGF-I/IGFBP-3, una estimación de IGF-I biológicamente activa, fue mayor en t-I (72,6±6 ng/ug) que en t-II (46,9±3,9, p<0,005) y C (47,0±3,3, p<0,002). La concentración sérica de IGFBP-1 fue significativamente menor en t-I que en t-II y C. La relación IGF-I/IGFBP-1 fue mayor en t-I (7,38±1,14) que en t-II (3,37±0,79, p<0,007) y C (4,05±0,49, p<0,005). Dado que IGF-I es mitogénico en cáncer de mama, los niveles aumentados de la relación IGF-I/IGFBP-3 en t-I podría asociarse con un mayor riesgo de cáncer de mama en este grupo. 446. Influencia del nivel de instrucción (NI) y cobertura en
salud (CS) en la prevención de efectos colaterales de la
quimioterapia antineoplasica (QMTA). Ignacio J. Villar(1), Mercedes
Salamano(1), Silvina Bravo(1), Mónica Fioría(1), Stella M.
Pezzotto(2), Leonor C. Poletto(2). La QMTA produce efectos indeseables, influenciados por la psiquis del paciente y la contención en la atención. Se analiza si la información oral y escrita (IOE) versus información oral (IO) modifica la fatiga, náuseas y emesis (FNE) postQMTA en pacientes con cáncer de mama (CM) tratadas con doxorrubicina y ciclofosfamida. Este ensayo clínico aleatorizado incluyó a las pacientes ingresadas al Servicio desde el 1/1/00 hasta el presente, dividiéndolas en dos grupos: IOE, IO. En cada ciclo se efectuó antiemesis con metoclopramida (MP) u ondansetrón (ON) según prescripción oncológica con la siguiente norma: 1) MP 60 mg endovenoso (EV) más dexametasona (DX) 8 mg EV y MP 20 mg cada 8 hs vía oral (VO) por 3-5 días. 2) ON 16 mg EV más DX 8 mg EV y MP 20 mg cada 8 hs VO por 3-5 días. Se diseñaron scores para evaluar FNE luego de cada ciclo, agrupándose los puntajes de las respuestas según el tipo de información y antiemesis. Pacientes incluídos: 30 (115 ciclos); Grupo MP (82 ciclos): 38 en IO y 44 en IOE. Grupo ON (33 ciclos): 14 en IO y 19 en IOE. No se observaron diferencias significativas en FNE según el tipo de información en el Grupo MP. Se encontraron diferencias significativas en fatiga (RR=0.34, p=0.002) y náuseas (RR=0.57,p=0.02), no en emesis, en el Grupo ON. Se observaron además diferencias significativas en NI (p=0.0001) y CS (p=0.02) entre MP y ON. Conclusión: La IOE en pacientes con CM con un mayor NI y con CS (Grupo ON) disminuiría el riesgo de fatiga y náuseas postQMTA. 447. La histamina regula la proliferación de una línea celular
de carcinoma pancreático humano. Gabriela Martín(1), Graciela
Cricco(1), Mariel Nuñez(1), Claudia Cocca(1), Alicia Gutierrez(1),
Vanina Medina(1), Maximo Croci(2), Rosa Bergoc(1), Elena Rivera(1). En la línea celular PANC-1 la histamina (Hi) en altas dosis y agonistas H2 (Ago2) inhiben la proliferación sin inducir apoptosis y sólo aumentan la expresión de algunos marcadores de diferenciación como la fosfatasa alcalina.Con el objetivo de profundizar los mecanismos involucrados en la acción de la Hi se realizaron estudios de proliferación, de ciclo celular por análisis de videoimágenes y determinación de PCNA por inmunofluorescen-cia. También nos propusimos obtener un modelo tumoral empleando ratones nude. Resultados: la Hi 0.1 uM (120%) y el antagonista H1 Pirilamina (286%) aumentan la proliferación mientras que el antagonista H1 Tripolidina no ejerce efecto (98%). La Hi 10 uM (54%) y Ago2 (58%) la inhiben. La expresión de PCNA corrobora estos datos, 100% de células positivas para Pir y sólo 50% para Ago2. No se observó aumento en el porcentaje de células en ninguna fase del ciclo celular respecto de los controles con Hi 10 uM y Ago2 a las 24 y 48 hs. Concluimos que la Hi a bajas dosis aumenta la proliferación a través de los receptores H1 y el efecto de la Pir, no observado con Tripolidina, se debe a su característica de agonista inverso.La inoculación de 3x106 celulas en ratones nude produjo tumores en un 86% (13/15), con una latencia de 14±8 días y una sobrevida de 71±30 días desde la inoculación. La histología muestra un adenocarcinoma ductal diferenciado, que conserva la morfología de las células en cultivo y resulta adecuado para estudios in vivo. 448. Parámetros de radiosensibilidad de líneas de melanoma
humano. Natalia Norero(1), Vanina Medina(1), Mariel Nuñez(1),
Gabriela Martín(1), Graciela Cricco(1), Claudia Cocca(1), Elena
Rivera(1), Rosa Bergoc(1). El melanoma cutáneo ha alcanzado proporciones epidemiológicas y en muchos casos, la radioterapia constituye una importante alternativa terapéutica, sola o combinada con quimio o inmunoterapia. El objetivo de este trabajo fue determinar los parámetros de radiosensibilidad de dos líneas de melanoma humano con distinta capacidad metastásica (WM35, derivada de un melanoma primario y M1/15 de metástasis hepática). Las células se sembraron a bajo inóculo 2.000-3.000 células por frasco, por triplicado y 24 hs. después se irradiaron con Dosis de 0; 1; 1,4; 1,8; 2; 2,5; 3 y 5 Gray empleando una fuente de 137Cs de 8-8,11 Gray/min. La fracción de células sobrevivientes se evaluó contando el número de colonias con más de 50 células y empleando el programa Origin se graficaron las Curvas de Sobrevida empleando el Modelo Lineal-Cuadrático. Los parámetros de radiosensibilidad a y b fueron: para WM35, a = 0,369 ± 0,072 Gy -1 y b = 0,062 ± 0,024 Gy -2; para M1/15, a = 0,469 ± 0,030 Gy -1 y b = 0,063 ± 0,008 Gy -2. Asimismo, la observación al microscopio óptico post-irradiación mostró células multinucleadas y con pocos cambios morfológicos compatibles con apoptosis. A través de estudios de fragmentación de ADN y citometría de flujo se corroboró que en ninguna de las líneas se puede inducir la apoptosis, aún frente a diferentes estímulos. Concluimos que ambas líneas son igualmente radiorresistentes independientemente de su capacidad metastásica y parecen tener bloqueado su camino apoptótico. 449. Rol de la interacción CD44-ácido hialurónico en la
migración de células tumorales. Marina V. Cápula(1), Glenda
Ernst(1), Paula V. Cabrera(1), Guillermo Blanco(1), Elida Alvarez(1),
Silvia E. Hajos(1). La molécula de adhesión CD44 participa en eventos del desarrollo neoplásico. En este trabajo se analizó la participación de la interacción CD44-ácido hialurónico (AH) en los mecanismos de migración y diseminación tumoral. Se utilizaron dos líneas celulares derivadas de una leucemia T murina que presentan diferente comportamiento invasivo. Se estudió la capacidad de unión a AH de alto (a) y bajo (b) PM y se evaluó la actividad de metaloproteasas. Las células LBLa pero no las LBLc mostraron diferencias significativas con respecto a l a adhesión a AHb o a AHa: 48% vs. 20.3% (p<0.05). Utilizando cámaras de quimiotaxis ambas células migraron hacia HA, LBLa mostró un índice de migración mayor hacia AHb que hacia AHa (2.6 ± 0.1 vs 1.3 ± 0.1) (p<0.001). Ambos procesos fueron inhibidos por Mabs anti CD44 y por hialuronidasa. La adhesión a fibronectina (FN) mostró que las células LBLa se unieron más que las LBLc 81 ± 12 vs 41 ± 1 (p< 0.01). En ensayos de quimiotaxis la unión de LBLa fue inhibida por Mabs anti-CD18 pero no por anti-CD44. La capacidad invasiva de LBLa en matrigel fue inhibida por ambos anticuerpos. La actividad gelatinolítica de MMP-9 y MMP-2 fue mayor en sobrenadantes y extractos de membrana de LBLa. Los resultados obtenidos demostraron que LBLa expresa moléculas de adhesión que participan de la migración a través de la interación con AHb y FN y un nivel de actividad de MMP superior a LBLc concordando con su mayor capacidad invasiva previamente determinada. 450. LM-234p, una nueva línea celular derivada de un
adenocarcinoma mamario murino Esteban N. Gurzov(1), M.Mercedes
Binda(2), Graciela O. Scharovsky(3), R.Daniel Bonfil(4). A partir del tumor mamario murino M-234p, de origen espontáneo en una hembra BALB/c y mantenido por pasajes sc seriados en la cepa de origen, se obtuvo la línea LM-234p, actualmente con más de 50 pasajes in vitro. La inoculación sc de las células demostró que las mismas mantienen su capacidad tumorigénica. Se trata de células de fenotipo epitelioide, con un tiempo de duplicación de 19 horas en la fase de crecimiento logarítmico. El estudio de la capacidad adhesiva de LM-234p al plástico, al colágeno IV y a la laminina, demostró su alta adhesividad (70% y 90% de las células adheridas a los 5 y 30 minutos de sembradas, respectivamente). El estudio zimográfico de los medios condicionados por las células LM-234p, evidenció su capacidad para secretar activador de plasminógeno tipo uroquinasa (uPA) en su forma de bajo peso molecular cadena simple, así como la ausencia de metaloproteinasas. A través del análisis por ELISA del medio condicionado por LM-234p, se ha demostrado su capacidad para secretar el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF), detectándose un promedio de 310,18 pg/ml a partir de 100.000 células. El estudio cromosómico de LM-234p mostró un número modal cromosómico de 63, observándose cromosomas metacéntricos atípicos y otras anomalías cromosómicas. La existencia de este nuevo modelo para cáncer de mama podría ser de utilidad en el estudio de dicha patología a nivel experimental. 451. Acción citostática de flavonoides naturales y sintéticos
en distintas líneas celulares. Cecilia Poli(1), Viviana C. Blank(1),
Nora M. Marder(1), Leonor P. Roguin(1). Los flavonoides son metabolitos de las plantas que ejercen diferentes acciones biológicas, tales como actividad antiviral, antiinflamatoria y antitumoral. Con el propósito de evaluar la acción antimitogénica de varios flavonoides, estudiamos el efecto de 14 flavonoides naturales y 25 derivados sintéticos sobre el crecimiento de células provenientes de un linfoma y de un carcinoma cervical (Daudi y WISH, respectivamente). Cuando se estudió el efecto antiproliferativo de los compuestos naturales, se observó un comportamiento diferente en las dos líneas celulares. Mientras que el honokiol fue el compuesto más activo en inhibir la proliferación de células WISH (IC50 14 mM), la apigenina y la quercetina fueron más efectivas en células Daudi (IC50 20mM). Entre los flavonoides sintéticos, la 2´-nitroflavona y la 2´,6-dinitroflavona fueron los mejores agentes antimitogénicos tanto en células WISH (IC50 3mM) como en Daudi (IC50 20mM). Puesto que ha sido demostrada la actividad antiproliferativa del interferón-alfa2b (IFN-alfa2b) en células WISH, decidimos evaluar la acción de algunos flavonoides en presencia de IFN-alfa2b. En todos los casos ensayados se obtuvo un mayor efecto antiproliferativo, equivalente a la suma de los efectos de los componentes individuales. Los resultados obtenidos demuestran la efectividad de algunos flavonoides naturales y sintéticos como agentes citostáticos, y la mayor potencia biológica de los mismos en combinación con el IFN-alfa2b. 452. Expresión diferencial de IL-10/IL-10R en células
tumorales primarias y metastásicas de un linfoma B de rata. María J.
Rico(1), Pablo(ex aequo) Matar(1), Graciela O. Scharovsky(1). Previamente demostramos que las ratas portadoras del L-TACB presentan niveles séricos elevados de IL-10 y una marcada inmunosupresión. IL-10, producida por linfocitos T, fue el principal factor responsable de la inmunosupresión observada. Teniendo en cuenta que ciertos tumores tienen la capacidad de producir citoquinas inmunosupresoras, como IL-10, el objetivo del presente trabajo fue investigar la producción de IL-10 y su receptor específico (IL-10R) en células tumorales primarias y metastásicas del L-TACB. Se evaluó la concentración de IL-10 (ELISA) en medios condicionados de células tumorales primarias y metastásicas. Se investigó la expresión de IL-10R (CELISA) y se evaluó el efecto de IL-10 sobre la proliferación in vitro de células tumorales primarias y metastásicas. Las células metastásicas en cultivo produjeron IL-10 a razón de 526±34pg/ml/106 células; por el contrario, las células tumorales primarias no produjeron una cantidad medible de IL-10. Ambos tipos celulares expresaron IL-10R, aunque la cantidad del mismo en células metastásicas resultó significativamente superior a la de células tumorales primarias (p<0.001). IL-10 incrementó la tasa de proliferación in vitro de las células metastásicas en una manera dosis-dependiente, pero no afectó la de las células tumorales primarias. En conjunto estos resultados indican que IL-10, además de su acción inmunorreguladora, se comportaría como un factor de crecimiento autocrino para células tumorales metastásicas. 453. Correlación entre la expresión de HER-2, proteína del
shock térmico 27000 (Hsp 27) y receptores estrogénicos en cáncer de
mama con los grados histológicos y el estado de los ganglios
axilares. Graciela E. Laguens(1), Silvia Coronato(1), Vanda M.T. Di
Girolamo(1). La oncoproteína HER 2 (receptor para factores de crecimiento), Hsp27 y Receptores estrogénicos (RcE) son marcadores biológicos de carcinomas mamarios. El objetivo del presente trabajo fue determinar si existe correlación entre la expresión de estos marcadores con los grados histológicos de Bloom y Richardson y el estado de los ganglios linfáticos axilares.Sobre 34 carcinomas mamarios (11 grado I, 17 grado II, 6 grado III) se realizaron técnicas de inmunohistoquímica utilizando anticuerpos monoclonales comerciales HER 2 , Hsp27 y RcE. Las células positivas se cuantificaron y los datos se analizaron estadísticamente. Los resultados fueron los siguientes:A Relación con el grado histológico: la expresión de HER 2 aumentó significativamente en el grado II y III (p< 0.01) y no se halló diferencia significativa con Hsp27 (p=0.39) y con RcE (p=0.36). B.Estado de los ganglios linfáticos: la expresión de HER 2 y de RcE no se correlacionó con la presencia o ausencia de metástasis (p=0.62) y (p=0.74) respectivamente. Se encontró diferencia muy significativa entre la sobreexpresión de Hsp27 y la ausencia de metástasis ganglionar (p<0.0089). Conclusiones: HER 2 se halla asociado a tumores con mayor grado de malignidad; la Hsp27 se correlaciona con ausencia de metástasis ganglionares y el RcE es un factor independiente. Estos marcadores resultan de gran valor para conocer la susceptibilidad terapéutica del carcinoma mamario a drogas adyuvantes y predecir el curso de la enfermedad.
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