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SAIC ENDOCRINOLOGIA D 233. Dimorfismo sexual en la tumorigénesis hipofisaria inducida
por dietilestilbestrol (DES) en ratas F344. Luciana Pietranera1,
Gerardo Piroli1, 2, Alicia Torres3, Claudia Grillo1,2, Alejandro De
Nicola1,2 Se ha demostrado que las hembras (H) F344 estrogenizadas crónicamente desarrollan prolactinomas más grandes que los machos (M), lo que revierte por androgenización neonatal con pro-pionato de testosterona (TP). Ahora estudiamos por microscopía electrónica las características de los lactotropos de H, M y HTP gonadectomizados controles (C) y tratados con DES. A los 40 días de tratamiento, los animales H, M y HTP del grupo C presentaron lactotropos atípicos (tipo II y III). En los animales DES, los lactotropos revirtieron a la forma t?ica (tipo I); con un remanente de formas at?icas en MDES y HTPDES pero no en HDES. Por inmunocitoqu?ica, el n?ero de c?ulas que expresaron LH fue menor en HDES (39.7 ? 5.5 c?ulas/mm2) que en MDES (105.3 ± 6.6, p<0.01) y HTPDES (85.3 ± 11.0, p<0.01). Los lactotropos que presentaron inmunoreactividad para galanina fueron más numerosos en HDES (819.9 ± 40.1 células/mm2) que en MDES (574.9 ± 41.7, p<0.01) y HTPDES (535.8 ± 33.3, p<0.01). Conclusiones: 1) La mayor proporción de lactotropos típicos correlaciona con el mayor patrón secretorio de prolactina descripto en HDES. 2) El menor contenido de gonadotropos explicaría la menor expresión de receptores para esteroides sexuales observada en HDES. 3) La mayor expresión de galanina en HDES correlaciona con el mayor tamaño tumoral descripto en este grupo, corroborando el rol postulado para dicho péptido en la proliferación de lactotropos.
234. Caracterización parcial de un principio activo de la Pars
Tuberalis que estimula la liberación de prolactina desde la Pars
Distalis. Martha Lafarque, Marcelo Ezquer, Liliana Oliveros, Luis
Aguado Con anterioridad presentamos evidencias de que secreciones específicas de Pars Tuberalis (PT) bovina de naturaleza proteica liberan Prolactina (PRL) desde la Pars Distalis (PD) de rata. En este trabajo mostramos los avances en la purificación del factor/s de PT involucrado. Las PT fueron disgregadas en medio 199 con tripsina 0.25%. Las células fueron lavadas, cultivadas por 24 hs en medio 199 con antibióticos y sembradas en gradiente de Percoll. Resultados: Las células de las fracciones del 50 y 60 % de Percoll produjeron la mayor liberación de PRL (determinada por RIA) desde las células dispersas de PD. Dichas células de PT fueron cultivadas durante 48 hs, el medio fue centrifugado 8 hs a 22500 x g a 4 °C y sembrado en SDS-PAGE al 10%, obteniéndose 8 bandas de PM entre 109 y 30 kDA. Las proteínas eluídas del gel, se concentraron y utilizaron para estimular células de PD. Las bandas con actividad biológica presentaron un PM entre 77 y 106 kDA, indicando que ese sería el rango de PM correspondiente al factor/es proteico secretado por células específicas de la PT. Los resultados permiten especular que la PD sería su posible órgano blanco.
235. Estudio de la acción de péptidos en ganglio celíaco
sobre la liberación de esteroides ováricos en ratas in vitro en
diestro I. Nelson Villegas, Marisa Garraza, Miguel De Bortoli, Luis
Aguado La inyección intracerebroventricular (icv) de adrenalina (Ad)
produce en ratas en diestro I (DI) un aumento de Progesterona (P)
ovárica con intervención del Nervio Ovárico Superior (SON). El
objetivo fue estudiar si en el efecto mencionado, está involucrada la
acción de: sustancia P (SP), péptido intestinal vasoactivo (VIP) y
neuropéptido Y (NPY) sobre el Ganglio Celíaco (GC). A ratas hembras
Holtzman de 250 ± 25 g, bajo anestesia, se les extrajo el sistema
GC-SON-Ovario(O). Se colocaron en celdas separadas el O y el GC unidas
por el SON. El sistema se incub·en buffer Krebs-Ringer, a 37 °C en
baño metabólico con el agregado individual previo en la celda
ganglionar de los distintos péptidos y se determinó, por RIA, la
concentración de P y Androstenodiona (An) en el líquido de
incubación del O, a los 30, 60, 120, 180 min. Se toma como basales
los valores obtenidos solo con buffer en ambas celdas. Resultados:
(medias ± SEM ng/ml) P basal: 30'=0,076 ± 0,01; 60'=0,086 ± 0,01;
120'=0,10 ± 0,01; 180'=0,12 ± 0,01. Con NPY, VIP y SP, aumenta P en
todos los tiempos (p<0.05). An basal (medias ± SEM pg/ml):30'=3,4
± 0,36; 60'=3,5 ± 0,35; 120'=3,9 ± 05; 180'= 4 ± 0,5. Con NPY, VIP
y SP no se observan variaciones significativas en los tiempos
estudiados. En DI, la acción de VIP, NPY y SP sobre GC produce
aumento de P ovárica, similar a lo que se produce con Ad icv. Aunque
no se observa un aumento significativo, en los tiempos estudiados,
sobre An habría una tendencia opuesta a la obtenida en diestro II. 236. Respuesta fotoperiódica de la población gonadotropa en
golden hamster macho. Gloria Cónsole1, Ricardo Calan-dra23, Susana
Jurado1, Fernando Riccillo1, Karina Zitta3, Mónica Carino1, César
Gómez Dumm1 La exposición de los golden hamsters a fotoperíodos cortos (<12.5 hs) determina una temprana regresión de los órganos reproductivos, seguida por una recrudescencia espontánea. Se investiga el efecto de la privación de luz sobre la población gonadotropa adenohipofisaria. Grupos de 5 hamsters machos fueron mantenidos desde el nacimiento en fotoperíodos largos (FL: 14hs luz, 10hs oscuridad) o expuestos a fotoperíodos cortos (FC: 6hs luz, 18hs oscuridad) durante 8, 16, 22 y 28 semanas. Las hipófisis se procesaron para microscopía de luz. Los cortes histológicos se inmunomarcaron mediante anti-FSH-LH-EnVision-DAB. Se registraron los parámetros estereológicos por medio de un analizador de imágenes (Optimas). La densidad de volumen (DV x10-2) y la densidad de células (DC x10-4) no mostraron alteraciones significativas en FC-FL. FL FC
237. Influencia de la matriz extracelular en la morfología y
función de la célula de Leydig, in vitro. Emilce Diaz1, Eliana
Pellizzari2, Silvina Meroni2, Selva Cigorraga2, Livia Lustig1, Berta
Denduchis1 El objetivo de este trabajo es estudiar la influencia de las
proteínas de la matriz extracelular (ME) sobre la morfología y la
función de las células de Leydig (CL).Se aislaron CL de rata adulta
y se cultivaron en placas recubiertas o no con laminina-1 (L-1),
colágeno IV (C-IV) o fibronectina (FN) durante 3 ó 24 hs.La
adhesión celular se determinó por un método colorimétrico ( D.O. a
600nm en lector de ELISA). Las CL cultivadas sobre ME revelaron un
grado de adhesión mayor; sin ME:0.17 ± 0.01, L-1: 0.26 ± 0.01***,
C-IV: 0.26 ± 0.1***, FN: 0.30 ± 0.01*** ( X ± ES, n=8,
***P<0.001). Dicho incremento correlaciona con la dosis de
proteína utilizada (1-8 ug/hoyo), L-1: 1.6-2.2, C-IV: 1.3-2.5 veces
de aumento.Las células cultivadas durante 24 hs sobre L-1, C-IV o FN
sufren un extenso proceso de “spreading” por el cual adquieren
abundantes y largas prolongaciones a diferencia de las sin ME. Por
inmunofluorescencia, se observó expresión de receptores de
proteínas de la ME (integrina a3 b1). Se detectó, una inhibición de
la secreción de testosterona (T) (ng/106 c?ulas) en el medio
condicionado de las CL cultivadas sobre C-IV ·FN; sin ME: 8.1 ? 0.5,
C-IV: 6.1 ? 0.2**, FN: 6.5 ± 0.2 ** a las 3hs; sin ME: 40.4 ± 1.7,
C-IV: 12,8 ± 1.2**, FN: 36.1 ± 1* a las 24hs ( X ± ES, n=8,
*P<0.05; **P<0.01). Dicho efecto es revertido por anti-cuerpos
anti-b1. Los datos con L-1 indicarían que ésta no afecta la
producción in vitro de T. En conclusión, en las CL las proteínas de
la ME inducen cambios en la adhesión, morfología y secreción de T,
in vitro. 238. Identificación de las células productoras de TNF-a en la
adenohipófisis de rata. Susana Theas. Livia Lustig, Macarena
Pampillo. Beatriz Duvilanski. Mercedes Lasaga. Adriana Seilicovich El TNF-a es un mediador importante de la respuesta inmuno-neuroendócrina durante la infección, la inflamación y el estres. Dado que previamente hemos demostrado que el TNF-a ejerce una acción inhibitoria sobre la proliferación celular adenohipofisaria y la liberación de prolactina de manera variable a lo largo del ciclo estral y dependiente de estrógenos, evaluamos la liberación basal de TNF-a desde cultivos monocapa de células adenohipo-fisarias provenientes de ratas en diferentes etapas del ciclo estral. La liberación de TNF-a (determinada por ELISA) desde células adenohipofisarias de ratas en proestro fue significativamente mayor que en la de ratas en diestro (proestro: 17.55 ± 2.66 pg/mL, estro: 12.82 ± 1.46, diestro:10.36 ± 1.21; p<0.01; n=6-7). Con el objeto de identificar las células productoras de TNF-a, fueron realizadas técnicas de inmunofluorescencia de doble marcación, empleando anticuerpos anti TNF-a, ACTH, PRL, GH y S-100. Todos los tipos celulares estudiados expresaron TNF-a (corticotropos: 94%, lactotropos: 86%, somatotropos: 43% y folículo estrelladas: 29%). Estos resultados indican que el TNF-a liberado desde diversos tipos celulares podría actuar como un factor autocrino/paracrino en la regulación de la secreción de prolactina durante el ciclo estral.
239. Efectos estacionales de transplantes hipofisarios sobre
ritmos diarios de secreción de prolactina (PRL) y gonadotrofinas en
ratas. Rodolfo Cutrera, Ana Esquifino, David Pazo, Daniel Cardinali Con objeto de estudiar el efecto del transplante hipofisario sobre los niveles circulantes de PRL y gonadotrofinas en diferentes épocas del año, se transplantaron ratas recién nacidas en primavera u otoño, sacrificándoselas 3 meses después en grupos de 6-8 animales cada 4 h durante 24 h. En ratas controles (operación simulada) se observó un ritmo diario en PRL, con acrofase a 21:53 - 00:54 h (cosinor), siendo mayor el valor medio y la amplitud en primavera en machos (F= 14.8 y 6.70, p<0.001; ANOVA) y en otoño en hembras (F= 8.46 y 3.66, p<0.01). En ratas transplantadas no se observaron cambios en la acrofase del ritmo de PRL. Los machos transplantados en primavera presentaron niveles de PRL más altos que los controles sólo en algunos puntos del ciclo diario, mientras que en los transplantados durante el otoño, no se observó tal aumento. Las hembras transplantadas en primavera mostraron niveles de PRL más altos que los controles en todos los horarios (p<0.01), mientras que las sacrificadas en otoño no presentaron diferencias. Se observó ritmo diario en LH sólo en machos controles, con acrofase a las 23:52 h en primavera y a las 00:24 h en otoño, siendo el valor medio y la amplitud significativamente más altos en otoño (F=10.1 y 4.93, p<0.0001). Los transplantes hipofisarios suprimieron las variaciones diarias de LH con disminución de los niveles de LH y FSH en las dos estaciones examinadas (ANOVA factorial; p<0.05). Estos resultados indican que la hiperprolactinemia resultado de los transplantes hipofisarios es dependiente de la época del año en la que se efectúa la cirugía.
240. Niveles de FSH, LH, PRL, GH, TSH, insulina y testosterona
en ratas jóvenes y viejas luego de la inyección de adjuvante de
Freund. Carlos Reyes Toso, Manuel Bonacho, Ana Esquifino, Patricia
Castrillón, José Apphatie, Daniel Cardinali Se han estudiado poco los cambios producidos por la respuesta inmune sobre la secreción hormonal en el envejecimiento. En el presente trabajo se examinó la modificación de ritmos circadianos hormonales luego de la inyección de adjuvante de Freund (AF). Se emplearon ratas Wistar macho de 2 y 18 meses de edad, tratadas con AF o su vehículo (V) y sacrificadas 18 días más tarde cada 4 h durante 24 h (n= 5-7/grupo). Se recogió plasma para la determinación por RIA de FSH, LH, GH, TSH, PRL, insulina y testosterona. En ratas jóvenes tratadas con V se observaron máximos en LH y testosterona a las 01:00 y 17:00 h (F= 6.71, p< 0.0005, ANOVA) los que desaparecieron luego de inyectar AF. Para TSH, al máximo de las 1300 h se sumó un segundo pico a la 0100 h luego de AF (F= 2.94, p= 0.03). Los niveles de PRL en ratas viejas tratadas con AF o con V mostraron máximos a las 13:00–17:00 h al igual que los de insulina con AF (F= 2.34 p< 0.04). A las 2100 h se registraron picos de PRL en las ratas viejas con AF, y de insulina con AF o V (3.53 p < 0.0005). En ratas viejas no se observaron ritmos diarios en LH, TSH y testosterona, detectándose mayores niveles (pg/ml) de PRL (2032 ± 231 vs 700 ± 98) y menores de GH (3245 ± 536 vs 1056 ± 215), TSH (512±76 vs 278 ± 34), FSH (5523 ± 654 vs 3110 ± 456) y testosterona (3245 ± 543 vs 1432 ± 233) (p< 0.01), sin alteraciones apreciables luego de AF. Estos resultados sugieren que la inmunización altera los mecanismos circadianos de control neuroendocrino en forma diferencial con la edad.
241. Papel del óxido nítrico endógeno sobre la liberación de
prolactina durante el ciclo estral. Miguel Velardez, María del Carmen
Díaz, Mercedes Lasaga, Hernán Otero, Beatriz Duvilanski La s?tesis de ?ido n?rico (NO) est·regulada diferencialmente por el estado gonadal. En este trabajo se estudi·el papel del NO end?eno sobre la liberaci? de prolactina durante el ciclo estral. Las adenohip?isis de ratas hembras se incubaron en presencia de inhibidores de la NO sintasa, L-NAME y Aminoguanidina, AG. L-NAME (0.5 mM) no afect·la liberaci? de prolactina en ratas en diestro (Diestro: 1.33 ? 0.17 mg/mg prote?a, L-NAME: 1.32 ? 0.18, n=6), pero aument·significativamente la liberaci? de prolactina en ratas en proestro y estro (Proestro: 2.05 ± 0.10, L-NAME: 2.90 ± 0.11, n=6, p<0.01; Estro: 1.58 ± 0.24, L-NAME: 2.70 ± 0.12, n=6, p<0.01). Se obtuvieron resultados similares con AG. Además, la AG (0.5 mM) no modificó la liberación de prolactina en ratas ovariectomizadas (OVX) pero la aumentó en ratas estrogenizadas crónicamente (OVX-E2) (OVX: 1.59 ± 0.18, AG:1.45 ± 0.10; OVX-E2: 4.53 ± 0.40, AG: 7.38 ± 0.87, n=8, p<0.01). El NO exógeno (nitroprusiato de sodio, NP 0.5 mM) no afectó la liberación de prolactina en ratas OVX-E2 (OVX-E2: 4.35 ± 0.41, OVX-E2 + NP: 4.93 ± 0.44, n=8). Estos resultados indican que el NO endógeno estaría involucrado en el control esteroideo sobre la secreción de prolactina desde la adenohipófisis y sugieren que la concentración del NO liberado experimentaría cambios durante el ciclo estral y/o existiría una modificación de la sensibilidad de las células al NO.
242. Efecto del óxido nítrico (NO) sobre el metabolismo del
ácido araquidónico en adenohipófisis de rata. Miguel Velardez*, Ana
Franchi‡, Beatriz Duvilanski* Diversos mecanismos intracelulares estarían involucrados en el efecto inhibitorio del NO sobre la secreción de prolactina. Previamente demostramos que el NO disminuye la concentración intracelular de calcio y cAMP en adenohipófisis. El ácido ara-quidónico (AA) y sus derivados de la vía de la lipooxigenasa (LOX) estimulan la secreción de prolactina. En el presente trabajo estudiamos el efecto del NO sobre la actividad de la 5-LOX y la ciclooxigenasa (COX) por el método de radioconversión de [3H]-araquidonato en los productos de cada una de estas enzimas, determinados por cromatografía en capa delgada. El nitroprusiato de sodio (NP), dador de NO, disminuyó la liberación de prolactina y la concentración de 5-HETE, producto de la 5-LOX (Control: 565.0 ± 72.8 cpm/mg proteína, NP 0.25mM: 520.0 ± 26.8, NP 0.5mM: 372.6 ± 31.4*, NP 1mM: 384.3 ± 54.1*, n=6 *p<0.05 vs Control), mientras que la oxihemoglobina (Hb), secuestrador del NO liberado, revirtió el efecto de NP (Hb 10-6M: 584.5 ± 37.5, Hb + NP 0.5mM: 558.7 ± 50.3). El NP no afectó la actividad de la COX. Sin embargo, L-NAME, inhibidor de la óxido nítrico sintasa, disminuyó la producción de derivados de la COX (PGE2: Control: 10536.7 ± 1333.6, NP 0.5mM: 11150.6 ± 530.5, L-NAME: 5370.2 ± 766.3*, n=6 *p<0.05 vs Control), sin afectar la actividad de la 5-LOX. La Hb produjo un efecto similar. Nuestros resultados indican que el NO afecta la actividad de las enzimas que intervienen en el metabolismo del AA en adenohipófisis. La disminuci? en la producci? de 5-HETE inducida por NP sugiere que esta v? metab?ica tambi? participar? en el efecto inhibitorio del NO sobre la secreci? de prolactina.
243. El neuroesteroide Allopregnenolona altera la receptividad
sexual de la rata. Laconi, Myriam, Casteller Guillermo & Cabrera,
Ricardo Allopregnenolona (All) y Pregnenolona (Pe) son neuroeste-roides con potentes acciones sobre el sistema nervioso central (SNC), modulando sistemas de neurotransmisión ligados a canales iónicos como el GABAérgico. Evidencias indican que el ciclo estral y algunos cambios en la conducta sexual de la rata estarían asociados a la acción de los neuroesteroides en el SNC. All suprime tanto la liberacion de GnRH como también la ovulación. El objetivo del trabajo fue evaluar las modificaciones en la conducta sexual de la rata posterior a la inyección intracerebro-ventricular (icv) de All (6uM) (n=8), Pe (6 µM) (n=8), vehículo (Krebs) (n=8) y Bicuculina (Bi 9,8 µM) (n=8). Se utilizaron hembras adultas (200-250 gr) en estro (E) y ovariectomizadas impregnadas con estrógeno (25 µg/rata sc) y progesterona (1mg/rata sc) (OVXi). Los datos fueron expresados como indice de receptividad (IR= lordosis/monta) tras 15 montas efectivas y analizados estadísticamente con ANOVA I y Student-Newman-Keuls. Treinta minutos después de la inyeccion icv de las drogas detalladas anteriormente, se evaluó la receptividad de las hembras. All indujo una disminución significativa del IR respecto a los animales inyectados con vehículo (IR=0,33 vs. 0,95 p<0,05 en E; e IR=0,40 vs. 0,98 p<0,05 en OVXi). Bi inyectada previamente a All bloqueó el efecto de All (IR= 0,98 vs 0,98). Pregnenolona no modificó el IR respecto de los animales inyectados con vehículo (IR= 0.97 vs 0.98 en OVXi). En conclusión, los neuroesteroides a - sustituídos como All modificarían la receptividad sexual de la hembra por mecanismos no genómicos que involucrarían la modulación del receptor GABAA, mientras que los b -sustituídos como Pe no modificarían este patrón conductual. Asimismo, esto nos indicaría una interacción entre mecanismos genómicos y no genómicos entre los esteroides ovaricos endógenos y los neuroesteroides.
244. Rol modulador neuroendócrino de Allopregnenolona en la
liberación de la Hormona Luteinizante. Griselda Moreno, Claudia
Bregonzio, Ricardo Cabrera La allopregnenolona (All) es un neurosteroide sintetizado tanto en el sistema nervioso central como en el periférico. Actúa a nivel del receptor GABAA potenciando la neurotransmisión GABAérgica. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la acción de All sobre los mecanismos regulatorios GABAérgicos centrales de la liberación de LH. Se utilizaron ratas hembras ovariectomizadas impregnadas con estrógeno (25ug) s.c. y progesterona (1mg/rata) s.c., a las cuales se les implantó unilateralmente una cánula de acero inoxidable en ventrículo lateral y una de silastic en la vena yugular derecha para la extracción seriada de sangre a intervalos de una hora, desde las 16 hs. hasta las 22 hs. inclusive. Todas las drogas fueron administradas en un volumen final de 1,2µl i.c.v. a las 15 hs.según el protocolo experimental: All 100 nM o su vehículo, Bicuculina (Bic), Bic + All, Phaclofen (Pha) o Pha+All. Los datos se analizaron estadísticamnete mediante ANOVA 1 seguido de test de Bon-ferroni. All produjo una inhibición en la liberación de LH (p<0.01) a las 19 hs. y (p<0.05) a las 20 hs. Bic administrada previamente a All revirtió el efecto inhibitorio observado. Pha tuvo un efecto inhibitorio per se sobre la liberación de LH (p<0.05) a las 19 hs y (p<0.01)a las 20 hs. pero no modificó el efecto de All. Concluimos que Allo posee un perfil de acción similar a otros agonistas GABA, ejerciendo un rol modulador negativo sobre la liberación de LH activando únicamente el sitio GABAA mientras que no modularía GABAB. Asimismo este efecto podría explicar una acción diferencial sobre las neuronas GnRH hipotalámicas tanto de los agonistas GABAA y GABAB.
245. Asociacion del efecto ansiolítico de allopregnanolona con
cambios hormonales cíclicos en la rata. Laconi, Myriam & Cabrera,
Ricardo Los neuroesteroides son moléculas derivadas de las hormonas esteroideas, sintetizados en el sistema nervioso central. Uno de ellos, Allopregnanolona (All), ha demostrado interactuar con el sistema GABAérgico. Objetivo: evaluar el efecto All en ratas hembras bajo diferentes condiciones hormonales ante una situación ansiogénica. Se utilizaron ratas adultas en ciclo y ovariecto-mizadas (OVX). Los grupos experimentales fueron: diestro1(D1), estro(E), OVX impregnadas (estrógeno, progesterona) y OVX sin impregnar. All (6mM), solución krebs (KRB) y Bicuculina (Bi) fueron administradas intracerebro ventricular. Se evaluó ansiedad (test de encrucijada elevada (Plus maze) y actividad locomotora (open field). Se cuantificó el tiempo de permanencia en el brazo abierto y cerrado (TPBA-TPBC), tiempo de permanencia en el extremo abierto distal (TPEAD), número de entradas en el brazo abierto y cerrado (NEBA-NEBC). La actividad locomotora no se modificó con All. All indujo un aumento significativo en TPBA y TPEAD en E (t test P=0,007) y OVX i (P=0,002) respecto de los controles. Bi per se no moficico el efecto ansiolitico de All, pero en combinacion con All a dosis crecientes este efecto fue removido. Los resultados sugieren que el efecto de All está influenciado por el estatus hormonal del animal; que All alteraría patrones comportamentales inducidos por situaciones ansiogénicas modulando a nivel del sistema GABAergico y puntualizaría además, el rol de las hormonas ováricas en la respuesta orgánica al stress.
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