MECANISMOS COEVOLUTIVOS ENTRE LOS RETROVIRUS Y SUS HUESPEDES. EL MODELO DEL TUMOR MAMARIO MURINO

IRENE NEPOMNASCHY#, VALERIA BUGGIANO*, ALEJANDRA GOLDMAN*, ISABEL PIAZZON#

División Medicina Experimental, Instituto de Investigaciones Hematológicas, Academia Nacional de Medicina, Buenos Aires

# Miembro de la Carrera del Investigador del CONICET (Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas)
* Becaria del CONICET

Resumen

El virus del tumor mamario murino (MMTV) se considera actualmente un mo-
delo de interés para investigar los mecanismos co-evolutivos entre los retrovirus y sus huéspedes. El MMTV es un retrovirus de tipo B que se transmite a través de la leche e induce adenocarcinomas mamarios por activación insercional de proto-oncogenes celulares. Existen también formas endógenas de estos virus integrados permanentemente en el genoma del ratón. Estos provirus se consideran el resultado de la infección de células de la línea germinal ocurridas en los últimos 4 a 5 millones de años. El marco de lectura abierto presente en el LTR 3' de los virus integrados codifica para un superantígeno (SAg) que es capaz de estimular una gran proporción de células T que comparten la región variable de la cadena b del TCR. La expresión de este SAg es crítica para el ciclo de vida del virus. Cuando un MMTV exógeno infecta al huésped, las células B resultan infectadas tempranamente y expresan el SAg viral. Las células T reactivas al SAg son reclutadas para responder al mismo y, como consecuencia, tanto las células T reactivas como los linfocitos B infectados se activan y comienzan a proliferar. Este hecho facilita la integración del MMTV y el incremento del número de linfocitos infectados, dando lugar a un importante aumento en la carga viral. Los linfocitos transfieren los virus a la glándula mamaria en la cual, bajo la influencia de hormonas esteroideas, se produce una gran amplificación de la carga viral. Se ha hipotetizado que la presencia de provirus Mtv endógenos conferiría una ventaja selectiva a la población murina, ya que al inducir la deleción clonal temprana de las células T reactivas a los mismos, protegería al huésped de la infección con un virus exógeno que codifique para un SAg con reactividad cruzada. Sin embargo, resultados recientes discutidos en este trabajo sugieren que los provirus Mtv pueden resultar desventajosos para la población murina ya que son capaces de recombinar con variantes exógenas, dando lugar a partículas virales altamente tumorigénicas. Estos resultados se discuten en relación a trabajos recientes que sugieren la participación de secuencias virales altamente homólogas a los virus MMTV en la carcinogénesis mamaria humana.

Abstract

Coevolutive mechanisms between retroviruses and their hosts. The murine mammary tumor model. Mouse mammary tumor virus (MMTV) is a type B retrovirus that is transmitted as an infectious milk-borne particle and that causes mammary carcinomas by insertional activation of cellular protooncogenes. Germ line infections result in endogenous Mtv proviruses integrated in the genome of most mouse strains. These endogenous proviruses have been integrated into the genomes of mice for only the past 3-5 million years. The open reading frame present in the 3' long terminal repeat (LTR) of the provirus encodes a superantigen (SAg) which is able to stimulate a large proportion of T cells sharing a common T-cell receptor b chain variable domain (vb). Expression of this SAg is critical to the MMTV life cycle. After expression of the SAg in B cells a significant number of T cells are recruited to respond to these MMTV infected cells. As a consequence both the T cells expressing the relevant TCR Vb domain and the infected B cells become activated and start dividing. This would facilitate integration of MMTV and amplify the number of virus infected lymphocytes. Most likely during lactation the mammary glands become receptive to viral infection. The presence of endogenous Mtvs induces an early clonal deletion of reactive T cells. For this reason it has been argued that the presence of these proviruses confers a selective advantage to the mouse population by protecting the host from infection with an exogenous MMTV coding for a cross-reactive SAg. However, recent results discussed herein suggest that Mtv proviruses may also be detrimental to the mouse population by participating in recombinations with exogenous MMTVs, giving rise to highly tumorigenic recom-binant particles. These results are discussed in the light of recent reports suggesting the involvement of viral sequences with a high homology to MMTV in human mammary tumorigenesis.

Dirección postal: Dra. Irene Nepomnaschy, Instituto de Investigaciones Hematológicas, Academia Nacional de Medicina, Pacheco de Melo 3081, 1425 Buenos Aires. Argentina

Recibido: 2-X-1996 Aceptado: 16-X-1996

El genoma humano contiene múltiples secuencias retrovirales endógenas (HERVs) que representan probablemente las huellas de infecciones ancestrales por retrovirus en células de la línea germinal. Se ha estimado que entre el 5 y el 10% del genoma de los mamíferos estaría compuesto por elementos introducidos por mecanismos que involucran transcripción reversa1. Alrededor del 10% de éstos pueden identificarse estructural-mente como provirus, es decir que contienen regiones LTR y sitios de unión a primers que flanquean regiones codificantes internas relacionadas a los genes gag y pol. Se ha postulado también que estas secuencias podrían ser el resultado de procesos evolutivos que habrían afectado a estructuras ancestrales más simples, sugiriendo que los retroelementos habrían evolucionado junto con el gen de la trascriptasa reversa2.
Los provirus parecen haber sufrido adaptaciones específicas a su estilo de vida endógeno. En primer lugar suelen ser transcripcionalmente silenciosos, fundamentalmente por efectos epige-néticos asociados a la metilación de su genoma3. En segundo lugar, son a menudo defectivos debido a la presencia de deleciones o mutaciones puntuales que los incapacitan para generar virus infecciosos4. Por último, muchos virus endógenos, aunque competentes para su repli-cación, son incapaces de hacerlo en sus propios huéspedes5.
Estas características llevaron a considerar que la presencia de los provirus endógenos no involucraba, salvo contadas excepciones, efectos patogénicos. Por el contrario, en los últimos años la utilización de modelos experimentales ha permitido hipotetizar que algunos provirus endógenos podrían conferir protección frente a la infección por virus exógenos relacionados6-8. Se ha sugerido recientemente que la falta de detección de virus infecciosos humanos relacionados a los HERVs podría deberse a la extinción de las variantes exógenas como consecuencia de la adquisición evolutiva de estos provirus. En este mismo sentido se ha propuesto que la ausencia de secuencias endógenas relacionadas a los lentivirus y spumavirus podría ser consecuencia del hecho de que, en términos evolutivos, estos virus sean muy jóvenes y su integración permanente al genoma como virus endógenos no haya ocurrido aún9.
Sólo muy recientemente se han encontrado evidencias de que la presencia de estos retrovirus integrados permanentemente al genoma podría estar asociada a diversas patologías. Entre éstas, la carcinogénesis en el hombre10-13.
El virus del tumor mamario murino (MMTV) se considera actualmente un modelo de interés para investigar los mecanismos co-evolutivos entre los retrovirus y sus huéspedes. A diferencia de los HERVs, en los que no se observan variaciones importantes en el número de copias y los sitios de integración de secuencias completas de los mismos, indicando un equilibrio evolutivo estable9, los MMTV estarían aún en plena evolución ya que en las poblaciones de ratones se detecta una gran variabilidad en cuanto a la presencia de provirus endógenos y a la existencia de variantes exógenas14-24. Por otra parte, el interés de este modelo experimental se ve aumentado por la reciente descripción de retrovirus endógenos humanos altamente relacionados al virus del tumor mamario murino.11, 25

Retrovirus

Ningún otro tipo de virus ha recibido tanta atención por parte de los científicos en los últimos años como los retrovirus5, 26. Este hecho refleja su importancia como patógenos del hombre y otros animales. Las infecciones que inducen pueden ser benignas, moderadas y fatales, como las ocurridas por infección con el virus HIV. La característica más remarcable de estos virus es su ciclo de replicación, el que conlleva consecuencias biológicas especiales, tales como la capacidad de adquirir y alterar la estructura y función de secuencias génicas del huésped y la de insertarse en la línea germinal y comportarse como un elemento transposable, con consecuencias genéticas que han tenido una fuerza importante en la evolución de los vertebrados. Poseen además una gran plasticidad ya que su genoma sufre rápidas alteraciones por mutación y recom-binación26-27. A pesar de la variedad de interac-ciones que mantienen con sus huéspedes, todos los retrovirus conocidos son similares en cuanto a la estructura del virión, la organización de su genoma y el modo de replicación. El virión posee una envoltura, codificada en el gen env; la nucleocápside interna está compuesta por tres o cuatro productos codificados en el gen gag. En el core se incluyen además varias proteínas que juegan un rol catalítico importante durante la replicación. Estas proteínas incluyen una proteasa y dos productos derivados del gen pol: la transcriptasa reversa cuyas actividades enzi-máticas intervienen en convertir la información genética de una cadena simple de RNA a una cadena doble de DNA, y una integrasa, necesaria para la unión covalente del DNA viral al DNA celular para formar así el provirus.
Los retrovirus poseen genomas diméricos: dos cadenas positivas de RNA homólogas o hete-rólogas, unidas en o cerca del extremo 5'28, modificadas de manera reminiscente a los RNA mensajeros celulares. El orden de los genes que codifican para las proteínas estructurales es invariablemente gag-pol-env. En algunos grupos de retrovirus, existen otros genes involucrados en la regulación de la expresión viral5, 26. En cuanto al ciclo de replicación, puede considerarse la existencia de dos fases: la primera incluye la entrada del core del virión al citoplasma y la síntesis de una cadena doble de DNA usando como templado a la cadena simple de RNA viral; la transferencia de esta estructura al núcleo y la integración del DNA al genoma del huésped. Estos pasos están mediados por proteínas que se encuentran dentro del virión y no requieren expresión de los genes virales. La segunda fase incluye la síntesis y el procesamiento del genoma viral, RNAm y proteínas, utilizando la maquinaria celular (por ej, la RNA polimerasa). El armado del virión ocurre por encapsidación del genoma por fusión de proteínas codificadas en los genes gag y pol y por proteínas codificadas en el gen gag , asociación de la nucleocápside con la membrana celular; la salida del virus ocurre por brotación26.
Una de las características de los provirus (DNA viral integrado al genoma) es la de presentar secuencias repetitivas en sus extremos terminales 3' y 5', denominadas LTR. Los LTR se originan como consecuencia de la actividad de la transcriptasa reversa durante el proceso de retrotranscripción, en que esta enzima es capaz de «saltar» de un templado a otro26-27, 29. Los LTR contienen virtualmente todas las secuencias necesarias para la integración y posterior expresión del provirus.

Virus del tumor mamario murino (MMTV)

El virus del tumor mamario murino (MMTV) es un retrovirus de tipo B descubierto hace más de 50 años como una entidad transmisible a través de la leche que induce carcinomas mamarios en su huésped30. El tipo celular más permisivo para la replicación del MMtv es el epitelio alveolar de la glándula mamaria31. Durante la lactancia, la expresión de este virus se incrementa marca-damente por influencia de las hormonas este-roides. La aparición de tumores ocurre después de un largo período de latencia, lo que sugirió inicialmente que los MMTV no codifican para oncogenes. En efecto, se ha determinado que los tumores que se desarrollan a partir de la integración de estos virus al genoma celular son el resultado de la activación de oncogenes celulares32-33.
El MMTV es un retrovirus típico que contiene un genoma de 8,5- kb. La cápside contiene dos cadenas simples de RNA asociadas con moléculas de transcriptasa reversa, proteínas derivadas del gen gag y tRNALys del huésped utilizado como primer para la retrotranscripción.
Los MMTV no sólo existen como virus infecciosos exógenos sino también como provirus endógenos (Mtv) integrados permanentemente al genoma del ratón33 y heredados de manera mendeliana. Tanto las cepas de ratones mantenidas en los bioterios como los ratones de poblaciones naturales poseen entre 2 y 14 provirus Mtv distintos en su genoma34. La mayoría de los virus Mtv endógenos han perdido su capacidad para producir partículas virales infecciosas. Tanto los MMTV exógenos como los endógenos codifican para un superantígeno en la región ORF localizada en el extremo 3' del LTR14, 35.
El virus MMTV se ha desarrollado una estrategia para explotar el sistema inmune de manera tal que la infección de ratones recién nacidos o adultos lleva a una infección crónica que dura toda la vida. La ruta natural de entrada es a través de la leche. Una vez que el virus atraviesa el tubo digestivo, interacciona con el sistema inmune en las placas de Peyer, infectando a los linfocitos allí presentes15. Es necesario que el sistema inmune esté intacto para que el MMTV complete su ciclo de vida28. La expresión de superantígenos colabora a la amplificación viral y posteriormente las células del sistema inmune trasladan al virus a la glándula mamaria36, 37.

Inducción de tumores de mama por MMTV

El MMTV es un virus transformante no agudo que no codifica para ningún oncogén. Sin embargo, su integración en el genoma del huésped constituye un evento que es potencialmente mutagénico. En efecto, se ha demostrado que estos virus actúan como un mutágeno insercional que causa la desregulación de los genes celulares adyacentes, siendo un potente inductor de tumores mamarios38. La desregulación de oncogenes celulares designados Int está altamente implicada en la tumorigénesis mamaria. El principal mecanismo por el cual el MMTV activa la expresión de estos oncogenes es una consecuencia del efecto de secuencias enhancer ubicadas dentro del LTR del genoma provisional sobre el promotor transcripcional del gen adyacente afectado. Se ha descripto sin embargo otro tipo de alteraciones de la expresión de oncogenes derivada de la integración del genoma viral dentro de la secuencia del oncogén afectado, lo que resulta en algunos casos en un transcripto quimérico truncado del gen rearreglado39. Estos virus pueden ser considerados entonces carcinógenos biológicos que inducen mutaciones somáticas como consecuencia de su integración en el genoma celular del huésped.
Cada estadío de la tumorigénesis mamaria parecería ser el resultado del crecimiento clonal de células que contienen nuevas integraciones virales. Este hallazgo ha permitido una aproximación a la identificación de genes que, al estar afectados, pueden contribuir a la progresión a través de diferentes estadíos de la carcinogénesis mamaria.
Se han detectado alteraciones genéticas en por lo menos ocho genes diferentes (Int1/Wnt1; Wnt3; Wnt10b; Int2/Fgf3; Fgf4; Fgf8; Int3 e Int6) en múltiples tumores mamarios como consecuencia de la integración de estos retrovirus40. Los genes Wnt pertenecen a una familia de doce o más genes relacionados al gen wingless (wg) de Drosophila. En base a estudios desarrollados en Drosophila, se ha sugerido que una de las funciones de este gen sería aumentar la adhesión celular dependiente de calcio a través de la transducción de señales que regulan el nivel del pool de b-catenina intracitoplasmática y estabiliza su unión a la caderina. Los genes Wnt1 y Wnt3 no se encuentran expresados normalmente en la glándula mamaria, aunque se expresan durante el desarrollo embrionario y en otros tejidos adultos. Varios de los otros miembros de esta familia de genes se expresan en estadíos definidos de la diferenciación y el desarrollo de la glándula mamaria. Los genes Fgf 3, 4 y 8 son miembros de la familia del gen del factor de crecimiento fibroblástico. Estos genes sólo se expresan durante el desarrollo embrionario temprano o en el adulto, pero no en el tejido mamario normal. Los miembros de esta familia exhiben un rango de actividades biológicas superpuestas pero no idénticas: pueden actuar como mitógenos, quimio-atractantes, mediadores de la diferenciación celular y como potentes factores angiogénicos40. El gen Int3 posee una secuencia nucleotídica con homología al gen Notch de la Drosophila, aunque no es el homólogo murino de este gen sino uno de los miembros de la familia. El producto normal de este gen se encuentra en la glándula mamaria de hembras vírgenes, preñadas y lactantes. Las integraciones virales que se observan dentro de este gen determinan la sobreex-presión del dominio intracelular de la proteína. Ratones transgénicos que expresan Int3 activado por MMTV, desarrollan 100% de tumores mamarios focales. Otro sitio común de inserción para el MMTV es el gen Int6. Este gen se expresa en todos los tejidos adultos, incluyendo la glándula mamaria y ha sido altamente conservado durante la evolución. La secuencia aminoacídica de los productos de este gen son idénticos en el ratón y en el hombre40.

Superantígenos

El término superantígenos (SAg) se aplica a un grupo de moléculas que, unidas a antígenos mayores de histocompatibilidad (MHC) de clase II, estimulan células T portadoras de una cadena Vb particular en su receptor, independientemente de la cadena que éste posea41, 42. Este hecho hace que posean una muy potente actividad estimula-toria de los linfocitos T43.
El impacto del sistema inmune con superan-tígenos implica una fase inicial de proliferación celular de las células T reactivas al mismo. Esta expansión linfoidea es seguida por la inducción de deleción clonal o inactivación funcional (anergia) de estas células16, 44, 45.
Los superantígenos difieren de los antígenos convencionales en muchos aspectos en cuanto a su interacción con el receptor T (TCR). En el caso de los péptidos antigénicos convencionales, todos los elementos variables de ambas cadenas a y b (Va, Ja, Vb, Db, Jb) contribuyen a la interacción del TCR con el complejo péptido-MHC. Los complejos superantígeno-MHC clase II, en contraposición, interaccionan exclusivamente con el elemento Vb del TCR en una región de la cara lateral que no está involucrada normalmente en el reconocimiento de los antígenos convencionales46. Como consecuencia del gran número de posibles combinaciones de todos los elementos variables de las cadenas a y b del TCR, la frecuencia de la respuesta T a un determinado péptido antigénico es por lo general muy baja (10-4 a 10-6). Por el contrario, cada superantígeno es capaz de reconocer entre uno y cuatro de un número limitado de productos de genes Vb (aproximadamente 20 en ratones y 50 en humanos) y de estimular todas las células T que posean dichos productos Vb. Esto resulta en la estimulación de un gran número de células T. Algunos superantí-genos son así capaces de afectar hasta el 40% del total de la población T47, 48.
Además, a diferencia de los péptidos antigé-nicos convencionales, los superantígenos no requieren de procesamiento previo a la presentación por las moléculas de MHC clase II49 y se unen a dichas moléculas en sitios diferentes del hueco en que se presenta el antígeno convencional50.

Superantígenos endógenos y exógenos

Dentro del grupo de los superantígenos endó-genos se encuentran los antígenos murinos del sistema menor de estimulación linfocitaria (Mls). Estos fueron descubiertos originalmente por su capacidad de estimular fuertemente la proliferación de células con el mismo haplotipo MHC en reacciones de cultivo mixto de linfocitos51. En estas reacciones, un gran número de células T vírgenes responden al estímulo de los antígenos Mls. Existen alelos estimulatorios (designados a) y alelos nulos (designados b). Recientemente se han identificado estos y otros superantígenos, como los productos de genes de distintas variantes de retrovirus del tumor mamario murino endógenos (Mtv)17, 18.
Los superantígenos exógenos son producidos por una variedad de microorganismos. Incluyen proteínas secretadas tanto por bacterias gram-positivas Staphylococcus aureus43 y Streptoco-ccus pyogenes52, como por Mycoplasma arthri-ditis53. Dentro de los superantígenos exógenos, también se incluyen los codificados por los virus MMTV16, 19, por el virus de la rabia54, 55 y por Myco-bacterium tuberculosis56.
Ambos tipos de superantígenos (endógenos y exógenos) inducen in vitro una intensa proliferación de las células T que expresan los productos Vb correspondientes; pero una continua exposición in vivo a cualquiera de los dos tipos de superantígenos induce la eliminación o inactiva-ción funcional de dichas células T.

Superantígenos codificados por retrovirus MMTV

Se ha demostrado que todos los superan-tígenos endógenos Mls están codificados por virus Mtv endógenos17, 25, 56. Por ejemplo, el retrovirus Mtv-7 cosegrega con el superantígeno Mls-1a en el cromosoma 1, el Mtv-6 con el su-perantígeno Mls-3a en el cromosoma 16 y el Mtv-13 con el sag Mls-2a.
Los MMTV exógenos presentes p.e. en la cepa de ratones C3H, también codifican para un superantígeno que puede ser transmitido verticalmente por la leche de ratones infectados por el virus, el cual induce la deleción de las células T Vb14+16. Dos grupos han demostrado que este superantígeno está codificado por un gen del ORF (marco de lectura abierto) del LTR 3' (long terminal repeat) del MMTV14, 18.
Se ha demostrado que las distintas variantes de los MMTV codifican para diferentes Sags14, 19, 21-24. Estos son glicoproteínas de superficie de tipo 2, que presentan una gran variabilidad en su extremo carboxiterminal. Esta variabilidad determina la especificidad de reconocimiento por la región Vb del receptor T.
La expresión de superantígenos resulta crítica para el ciclo de vida del MMTV. Las primeras fases de la infección afectarían casi exclusivamente a las células B para más tarde infectar a los linfocitos T. Como ocurre con otros virus, la infección y replicación de los MMTV es más eficiente en células en división. Los linfocitos B infectados expresan el superantígeno en su superficie, asociado a moleculas de clase II. Este complejo Sag/moléculas MHC de clase II estimula a las células T portadoras de una cadena Vb apropiada en su receptor. La estimulación de estos clones T reactivos al superantígeno induce la proliferación de las células B infectadas, lo que da lugar a la amplificación viral. Posteriormente, las células T reactivas entran en un estado de inactivación funcional y/o son progresivamente delecionadas.
Complejidad de la interacción virus MMTV-huésped. Los provirus endógenos del MMTV protegen al huésped de la infección con virus MMTV exógenos relacionados

Cuando el huésped posee un provirus del tumor mamario murino endógeno, expresa constitutivamente el superantígeno codificado en su ORF. La expresión del superantígeno induce la deleción intratímica temprana de las células T reactivas al mismo16, 28, 31, 45. Si este huésped es infectado por un virus que expresa un Sag con reactividad cruzada con el codificado por el Mtv endógeno, estaría protegido de la infección ante la ausencia de las células T que, al reconocerlo, permiten su amplificación. Se ha postulado que la integración de provirus Mtv endógenos en el genoma del ratón constituiría entonces una ventaja selectiva, ya que protegería al mismo de la infección con virus exógenos. Resultados obtenidos utilizando diferentes modelos experimentales apoyan esta hipótesis6, 7. Así, ratones transgénicos para el ORF del virus MMTV exógeno de C3H que expresan el superantígeno correspondiente a este virus, y muestran en consecuencia una deleción temprana de las células TVb14+ reac-tivas al mismo, se muestran resistentes a la infección con el virus MMTV C3H exógeno, desarrollando un porcentaje significativamente menor de tumores mamarios. Correlativamente, el título de virus en leche se ve muy disminuido. Cuatro generaciones más tarde, la transmisión del virus exógeno no puede detectarse. Estos resultados indican que en los ratones portadores del provirus endógeno opera una presión de selección negativa para el virus infeccioso que expresa un superantígeno igual al codificado por el provirus. Este y otros experimentos similares permitieron hipotetizar que la adquisición permanente de estos provirus en el genoma del ratón protege al mismo de la infección con virus exógenos relacionados.
Sin embargo, la presencia de provirus Mtv integrados permanentemente al genoma del huésped presenta también ventajas selectivas para el virus, al permitir la aparición de nuevas variantes infecciosas a través de mecanismos de recom-binación.

Recombinación entre virus MMTV exógenos y provirus endógenos. Surgimiento de variantes virales con alta patogenicidad.

La recombinación entre genomas de retrovirus fue demostrada por primera vez durante infecciones con distintas variantes del virus del tumor aviario57, 58 y con virus de la leucemia murina59. Se ha demostrado que los virus exógenos de la leucemia murina y del tumor aviario pueden recombinar además con secuencias virales endógenas60, 61. Finalmente, se ha establecido que estos retrovirus pueden recombinar con secuencias celulares para dar lugar a virus transfor-mantes62.
Los genomas retrovirales consisten en dos cadenas positivas de RNA que, en el virión maduro, están unidas cerca de sus extremos 5'. Algunos de los viriones producidos luego de infecciones mixtas contendrían cadenas de RNA heterólogas correspondientes a cada uno de los virus infectantes. Los intercambios genéticos ocurrirían cuando estos viriones heterocigotas infectan una célula. La hipótesis más aceptada actualmente sugiere que la recombinación puede ocurrir durante la retrotranscripción que da lugar a la cadena negativa de DNA debido a un salto de la transcriptasa reversa de un templado de RNA al otro63, 64.
La existencia de fenómenos de recombinación entre virus MMTV ha sido descripta muy recientemente. En 1994, Golovkina y col.65 reportaron que el virus MMTV exógeno de C3H y transcriptos del Mtv-1 endógeno pueden recombinar dando lugar a la expresión de nuevas variantes virales. El provirus Mtv-1 endógeno está altamente expresado en la glándula mamaria de las hembras C3H durante el período de lactancia66. Estos autores demostraron que existía empaquetamiento de RNA viral endógeno codificado por el Mtv-1 por los viriones del virus exógeno. El Mtv-1, sin embargo, es uno de los pocos provirus endógenos capaces de producir partículas virales completas, si bien en baja cantidad67.
En colaboración con estos autores hemos demostrado recientemente la existencia de recombinación entre un MMTV exógeno y un provirus Mtv no productivo e incapaz de expresarse en tejido mamario. El virus MMTV exógeno (BALB14) expresa un SAg que interactúa con células T Vb14+ e induce adenocarcinomas de mama sólo en el 30-35% de las hembras de la cepa BALB/c multíparas. Cuando este virus infecta huéspedes de cepas portadoras del provirus endógeno Mtv-7, es capaz de recombinar con éste dando lugar a una variante viral exógena que expresa el SAg del virus endógeno. Este virus recombinante (MMTV-7) no puede amplificarse en el huésped en el que se origina, ya que éste carece de los clones T capaces de reconocer al SAg adquirido. En efecto, su expresión en mama no se evidencia mediante ensayos de protección de RNasa T1, aunque puede ser detectado después de ser amplificado por técnicas de RT-PCR. Sin embargo, si las hembras en las que se origina el virus recombinante amamantan recién nacidos que no hayan heredado el provirus endógeno Mtv-7 y que por lo tanto posean clones T reactivos al SAg del virus, éste puede amplificarse notablemente. Así, dos generaciones más tarde, la incidencia de tumores de mama supera el 80% y la gran mayoría de estos tumores expresan el virus recombinante.
Estos resultados permiten hipotetizar que la presencia en el genoma del ratón de provirus endógenos no productivos —considerada hasta ahora como protectora frente a la infección con virus MMTV exógenos —ofrecería además ventajas selectivas para el virus al aumentar su variabilidad poblacional, permitiendo así la ampliación del rango de huéspedes susceptibles y la expansión de variantes con alta patogenicidad.

Secuencias humanas altamente homólogas a secuencias de MMTV

Desde el descubrimiento de que los virus MMTV eran un agente etiológico de los tumores mamarios murinos, ha existido un gran interés en la búsqueda de agentes similares en el hombre. Numerosos trabajos sugirieron la existencia de tal agente, aunque los resultados obtenidos se consideraron durante mucho tiempo controvertidos68-71. Se han descripto retrovirus endógenos altamente relacionados al virus del tumor ma-mario murino (HERV-K10, NMWV4, HML (Hu-man endogenous MMTV-like)11, 72. Recientemente, se ha reportado la existencia de partículas virales con actividad de transcriptasa reversa que empaquetan secuencias que poseen un 97,4% de homología con la familia HERV-K10 en una línea celular derivada de un carcinoma mamario humano10, 13. La expresión de estas secuencias se incrementaba alrededor de 30 veces luego de la estimulación con hormonas esteroideas. Otros autores han reportado que las partículas retrovirales producidas por esta misma línea celular (T47-D) podrían generarse por comple-mentación de varios provirus endógenos y podrían empaquetar transcriptos virales de orígenes diferentes12.
Por otra parte, Wang y col.73 utilizando una sonda para el gen env del virus MMTV, pudieron detectar la presencia de secuencias con alta homología con este gen en 121 de 314 (38,5%) biopsias de adenocarcinomas mamarios humanos, en 2 de 29 (6,9%) fibroadenomas mamarios y en 2 de 107 (1,8%) muestras de mamoplastías reductoras. La secuencia no fue detectada en tejidos mamarios normales ni en otras neoplasias humanas. Estas secuencias mostraron una homología del 95 al 99% con las secuencias del gen env del MMTV. Estos datos indican que alrededor del 40% de los tumores mamarios humanos contienen secuencias génicas homólogas al gen env del MMTV, que están ausentes en otros tumores y tejidos normales. Estos resultados abren la posibilidad de que agentes infecciosos con alta homología con el virus MMTV puedan desempeñar un rol en esta patología.

Agradecimientos: Este trabajo fue realizado mediante subsidios de la Fundación Antorchas, de FUNDALEU y del CONICET. Agradecemos a la Fundación de la Hemofilia el uso del citómetro de flujo y a la Dra. C.D. Pasqualini por su colaboración en la discusión de este trabajo.

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